生物素化FOXM1真核表达体系的构建及鉴定

• 作者: 谭拥军 谭桂湘 邹红春
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 生物学
• 关键词: 生物素化FOXM1 BirA生物素连接酶 HEK 293T细胞 亲和纯化 蛋白印迹
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 16-20
• 页数: 5页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.16605/j.cnki.1007-7847.2016.01.003

摘要

建立基于生物素AP-tag标签的FOXM1真核表达载体,利用生物素与链霉亲和素的高特异性、高亲和力的结合性质对FOXM1蛋白进行纯化,为后续鉴定其互作分子的研究奠定基础.分别构建真核表达载体pcDNA3.1-AP-FOXM1和大肠杆菌生物素连接酶BirA真核表达载体pcDNA3.1-BirA,将pcDNA3.1-AP-FOXM1和pcDNA3.1-BirA共转染人胚肾293T(HEK293T)细胞,用银染及Western印迹检测细胞裂解液,确定相关蛋白表达;用链霉亲和素琼脂糖珠纯化生物素标记的FOXM1,并考察FOXM1的互作蛋白是否可以同时被洗脱下来.研究发现构建的生物素标签真核表达体系能有效表达生物素化的目标蛋白FOXM1;该蛋白在Western印迹、pull-down等实验中可实现无需抗体的一步法应用;该体系可用于FOXM1互作蛋白的鉴定和功能分析.结果表明建立了基于生物素AP-tag标签的FOXM1真核表达体系,为FOXM1互作蛋白与功能的深入研究奠定了技术基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭桂湘		8	7	2.0	2.0
2	谭拥军		14	25	3.0	4.0
3	邹红春		1	0	0.0	0.0