生物素化标签真核表达载体的构建及其在蛋白检测中的应用

• 作者: 彭剑淳 樊炜 詹林盛 贾帅争 高博
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 生物素化作用 真核表达载体 pHAVI 印迹法 蛋白质 pull down
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 262-267
• 分类号: Q51
• 字数: 4377字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2011.04.006

摘要

目的 构建生物素化标签真核表达载体,利用生物素化蛋白检测快速、灵敏、简便的特点,对传统的Western印迹和pull down技术进行改进和优化.方法 利用pCI neo载体骨架构建生物素化真核表达载体.将红色荧光蛋白插入表达载体,用辣根过氧化物酶标记的链亲和素对融合蛋白进行Western印迹检测;将萤火虫荧光素酶插入表达载体,利用pull down技术定量分析生物素化效率;将丙型肝炎病毒NS4B蛋白插入表达载体,通过pulldown技术研究丙型肝炎病毒NS4B蛋白的蛋白质问相互作用.结果 构建的生物素标签真核表达载体能使目的 蛋白生物素化.报告基因定量分析结果表明目的 蛋白生物素化效率达72%.将该载体表达的融合蛋白应用于Western印迹和pull down技术中可实现无需特异性抗体的一步法快速检测.结论 将生物素化标签真核表达载体用于Western印迹和pull down技术,建立了快速、灵敏、简便的融合蛋白质检测新方法,为生命科学领域提供了一种有利的研究工具和通用技术平台.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贾帅争	军事医学科学院野战输血研究所	25	78	5.0	7.0
2	詹林盛	军事医学科学院野战输血研究所	64	450	11.0	19.0
3	彭剑淳	军事医学科学院野战输血研究所	23	345	8.0	18.0
4	樊炜	军事医学科学院野战输血研究所	4	6	2.0	2.0
5	高博	军事医学科学院野战输血研究所	11	28	3.0	4.0