地黄GGPPS1基因克隆及表达分析

• 作者: 何庆祥 冯卫生 史晶晶 朱昀昊 赵乐 郑晓珂 马利刚
• 来源期刊: 西北植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 地黄 RgGGPPS1基因 生物信息学分析 原核表达 表达分析
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 888-895
• 页数: 8页
• 分类号: Q785|Q786
• 字数: 5795字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7606/j.issn.1000-4025.2016.05.0888

摘要

以地黄为材料,通过分析地黄转录组数据,设计特异性引物,克隆了地黄牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase,GGPPS)基因的cDNA序列,命名为RgGGPPS1,GenBank登录号为KU258808.同时在生物信息学分析的基础上,进行原核表达、纯化以及组织特异性表达分析.结果显示:(1)RgGGPPS1基因开放阅读框为987 bp,编码328个氨基酸.(2)生物信息学分析结果显示,RgGGPPS1蛋白含有2个富含天冬氨酸的基序(DDXXXXDD和DDXXD),与芝麻等双子叶植物中的GGPPS蛋白相似性较高.(3)利用构建的原核表达载体pET-32a-RgGGPPS1在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达RgGGPPS1重组蛋白,采用Ni2+亲和层析得到了纯化的RgGGPPS1重组蛋白.(4)荧光定量PCR结果显示,RgGGPPS1基因在根中表达量最高,叶、茎中表达量较低.研究结果为进一步研究RgGGPPS1基因在地黄环烯醚萜苷生物合成途径中的功能奠定了基础.