E6AP蛋白结构域突变真核表达载体的构建及其生物学功能检测

• 作者: 丁丽华 刘文忠 叶棋浓 张亚楠 熊加秀 营孙阳 贾小萌 陈志达 陈滢洁
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: E6AP p53 结构域突变 泛素化 肿瘤
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 142-146
• 页数: 5页
• 分类号: Q51
• 字数: 4579字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2016.02.016

摘要

目的 构建E6AP蛋白结构域突变真核表达载体,并瞬时转染肿瘤细胞,对其生物学功能进行初步检测.方法 以本实验室保存带有myc标签的E6AP质粒为模板,采用PCR技术扩增出E6AP(1~494)结构域和E6AP (495~852)结构域(即E6AP的HECT结构域)编码区(CDS)序列,将其插入到pXJ-40-myc载体中,双酶切和测序验证后瞬时转染人胚肾293 T细胞,通过Western印迹鉴定其表达及功能;转染人乳腺癌细胞ZR75-1和人胃癌细胞BGC-823,通过CCK-8法测定细胞生长曲线. 结果 从E6AP蛋白全长CDS中扩增得到约1479、1071 bp的DNA结构域片段,并成功克隆至pXJ-40-myc载体上,且测序与目的序列完全一致;转染人胚肾293 T细胞后,目的蛋白在细胞内成功表达,并且E6AP(495~852)结构域可明显抑制P53蛋白水平,而E6AP(1~494)结构域无抑制作用;细胞生长曲线结果显示,转染E6AP(495~852)结构域突变质粒的乳腺癌、胃癌细胞较空载体细胞生长差异具有统计学意义,而E6AP(1~494)对细胞生长无明显变化. 结论 成功构建了myc-E6AP(1~494)、(495~852)结构域突变真核表达载体,为进一步研究E6AP蛋白在相关肿瘤发生、发展中的作用奠定一定的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁丽华	军事医学科学院生物工程研究所	47	135	6.0	8.0
2	张亚楠	军事医学科学院生物工程研究所	9	8	2.0	2.0
3	陈滢洁	军事医学科学院生物工程研究所	2	1	1.0	1.0
4	刘文忠		7	9	2.0	3.0
5	营孙阳	军事医学科学院生物工程研究所	5	19	1.0	4.0
6	陈志达	解放军总医院普通外科	12	31	3.0	5.0
7	熊加秀	内蒙古医科大学基础医学院	3	4	1.0	2.0
8	贾小萌	军事医学科学院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0