金黄色葡萄球菌β-溶血素的表达、纯化及中和性抗体的制备

• 作者: 刘成华 刘玉 李迪 杨光 靳鹏 高亚萍
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄球菌,金黄色 β-溶血素 溶血活性 抗体制备
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 127-132
• 页数: 6页
• 分类号: R378.1
• 字数: 5993字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2016.02.013

摘要

目的 利用大肠杆菌重组表达金黄色葡萄球菌外分泌毒素β-溶血素(β-hemolysin , Hlb )及其突变体HlbH-149-N ,检测其生物学活性,并制备其功能性抗体,探讨Hlb蛋白在金葡菌感染中的生物学意义. 方法 以金葡菌NCTC-8325基因组为模板,利用PCR技术扩增目的基因hlb,进一步构建重组表达载体pET28a-hlb,并转至大肠杆菌BL21(DE3),利用点突变技术构建重组表达载体pET28a-hlbH-149-N,经IPTG诱导表达目的蛋白,通过Ni2+柱亲和纯化获得Hlb蛋白及突变体HlbH-149-N蛋白;通过溶血实验检测Hlb及突变体HlbH-149-N蛋白的生物学活性,并制备Hlb特异性抗体,检测抗体的中和活性. 结果 获得了纯度较高的重组Hlb蛋白和突变体HlbH-149-N蛋白,溶血活性实验结果表明,重组Hlb蛋白能够裂解绵羊红细胞,而突变体HlbH-149-N蛋白不能裂解绵羊红细胞;不同物种红细胞对Hlb敏感性不同;制备了抗Hlb蛋白的多克隆抗体(anti-Hlb),ELISA和Western印迹实验结果表明,anti-Hlb能特异结合Hlb蛋白和突变体HlbH-149-N蛋白,同时发现,anti-Hlb可有效抑制Hlb对绵羊红细胞的裂解作用. 结论 获得了具有良好溶血活性的重组Hlb蛋白以及无溶血活性的突变体HlbH-149-N蛋白,并制备了具有中和活性的特异性抗体,为深入研究Hlb在金葡菌致病过程中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨光	军事医学科学院基础医学研究所	44	152	7.0	9.0
2	刘玉	军事医学科学院基础医学研究所	14	26	3.0	4.0
3	高亚萍	军事医学科学院基础医学研究所	26	80	5.0	7.0
4	靳鹏	军事医学科学院基础医学研究所	15	118	6.0	10.0
5	刘成华	军事医学科学院基础医学研究所	5	13	3.0	3.0
6	李迪	军事医学科学院基础医学研究所	2	8	2.0	2.0