抑制miR-140腺相关病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 梁宇杰 段莉 贺鹏
• 来源期刊: 广东医学
• 关键词: 腺相关病毒 miR-140 tough decoy 骨肉瘤细胞
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 970-973
• 页数: 4页
• 字数: 3805字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建一种抑制microRNA-140(miR-140)表达的腺相关病毒(AAV)载体系统,从而实现对细胞内miR-140表达水平的高效抑制.方法 应用分子生物学方法将腺相关病毒载体与miRNA诱饵microRNA tough decoy RNAs (TuD)相结合,构建pAAV-U6-miR-140-TuD-EGFP表达质粒;用脂质体转染法将pAAV-U6-miR-140-TuD-EGFP表达质粒和pAAV-RC、pAAV-Helper质粒共转染至AAV-293细胞中,包装生成携带miR-140-TuD的重组腺相关病毒rAAV-U6-miR-140-TuD-EGFP.进一步将病毒感染骨肉瘤细胞U2OS,定量RT-PCR检测miR-140-TuD对细胞内miR-140基因的沉默效果,并测定病毒的感染滴度.结果 DNA测序证明miR-140-TuD已成功构建到表达质粒pAAV-U6-MCS-EGFP中;AAV-293细胞表达绿色荧光蛋白提示共转染成功;rAAV-U6-miR-140-TuD-EGFP感染滴度约为4.1 ×1010· mL-1;包装的重组腺相关病毒rAAV-U6-miR-140-TuD-EGFP感染U2OS细胞后,能显著下调U2OS细胞miR-140基因的表达水平.结论 携带miR-140-TuD重组腺相关病毒的包装成功,该病毒具有稳定沉默miR-140基因从而降低其表达水平的功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁宇杰	北京大学深圳研究生院化学生物学与生物技术学院	6	14	3.0	3.0
2	贺鹏	南方医科大学附属深圳恒生医院口腔科	4	5	2.0	2.0