葡萄扇叶病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 任芳 周俊 张尊平 李正男 胡国君 范旭东 董雅凤
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 葡萄 葡萄扇叶病毒 实时荧光定量RT-PCR 病毒浓度
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 538-548
• 分类号: S663.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0946

摘要

根据葡萄扇叶病毒(Grapevine fanleaf virus,GFLV)RNA2序列设计4对特异性引物,通过引物筛选、体系优化,建立了以FL-HP1-F/R为引物的GFLV的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR方法.该方法标准曲线循环阂值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为100％,相关性系数为0.998,灵敏性分别是常规RT-PCR和巢式RT-PCR的100倍和10倍.重复性试验表明组内和组间变异系数均小于2.59％,显示该方法具有较好的检测稳定性.内参基因的稳定性测试结果表明葡萄EF1和GAPDH基因具有较好的试验稳定性.利用建立的荧光定量方法测定12个葡萄样品中GFLV含量,并检测58个葡萄样品,结果表明不同葡萄样品中GFLV含量差异较大,最高含量是最低含量的81245.5倍,与ELISA和巢式RT-PCR相比,实时荧光定量方法能检测出更多的GFLV分离物.