家蚕V型ATP酶B亚基的克隆及表达特征

• 作者: 李懿 王鑫 谢康 赵萍 陈慧芳
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 家蚕 V型ATP酶B亚基 基因克隆 原核表达 Western blotting 免疫荧光定位
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 487-496
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.150364

摘要

V型ATP酶(Vacuolar-type ATPase)是一种定位于细胞膜和细胞器膜上的氢离子转运酶.它利用ATP水解的能量将氢离子转运到液泡、囊泡或者胞外,从而维持细胞内正常的酸碱环境.V型ATP酶B亚基(V-ATPase B)作为ATP的催化位点,也有着非常重要的作用.为了探讨家蚕V-ATPase B(BmV-ATPase B)的功能,首先从家蚕五龄幼虫的中肠cDNA中克隆了Bm V-A TPase B基因并构建原核表达载体进行原核表达,获得了重组蛋白,经质谱鉴定正确后,通过镍柱亲和层析的方法纯化了该蛋白并制备了多克隆抗体;最后分析了该蛋白在家蚕丝腺中的表达特征并利用免疫荧光对其在丝腺中的表达位置进行了定位.结果显示Bm V-A TPase B基因序列全长1 473 bp,预测蛋白分子量55 kDa,预测等电点5.3.通过Western blotting对家蚕5龄第3天和上蔟第1天幼虫丝腺的不同区段进行BmV-ATPase B蛋白的表达特征分析,发现在两个时期该蛋白均在前部丝腺高量表达,而在中部丝腺和后部丝腺表达量相对较低.进一步对两个时期丝腺的不同区段进行免疫荧光定位,发现该蛋白在两个时期的前部丝腺、中部丝腺和后部丝腺均定位于细胞层.利用激光共聚焦显微镜对该蛋白进行进一步的定位,发现该蛋白主要在丝腺的细胞膜表达.研究结果明确了该蛋白在丝腺中的表达模式,为深入研究该蛋白在蚕丝纤维形成中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵萍	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	33	235	9.0	14.0
2	王鑫	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	22	64	5.0	6.0
3	陈慧芳	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	1	4	1.0	1.0
4	谢康	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	2	7	2.0	2.0
5	李懿	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	4	8	2.0	2.0