孔石莼(Ulva pertusa)LAMP-LFD快速检测方法的建立

• 作者: 周前进 段丽君 段维军 苗亮 蔡怡 陈先锋 陈炯
• 来源期刊: 海洋与湖沼
• 学科: 生物学
• 关键词: 孔石莼 内转录间隔区 环介导等温扩增技术 横向流动试纸条 检测
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 页码范围: 380-389
• 分类号: Q948
• 语种: 中文
• DOI: 10.11693/hyhz20141200344

摘要

采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)进行核酸扩增,凭借横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)完成扩增产物检测,建立了可快速检测孔石莼(Ulva pertusa)的LAMP-LFD方法.该方法首先在孔石莼的内转录间隔区序列(internal transcribed spacer,ITS)的8个种内保守区域设计6条特异性引物(上游内引物由生物素标记),进行由生物素标记的LAMP反应;同时,在两条外引物的有效扩增区段内设计1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记的探针,生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针特异性杂交后,在LFD上完成结果显示.优化后LAMP的反应条件为63℃反应50min,加上探针杂交与LFD检测共需60min.结果表明,利用该LAMP-LFD方法可特异性地检出孔石莼,对浒苔(Ulva prolifera)等9种常见藻类的检测均呈阴性.利用该方法最低可检测到3.04× 10-2 pg/μL的孔石莼基因组DNA,是以LAMP外引物进行的常规PCR方法的1000倍.针对一定数量的实际样本的检测结果表明,LAMP-LFD方法与传统的形态学观察的结果一致.因此,本研究建立的孔石莼LAMP-LFD快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,有望成为我国东部沿海孔石莼快速检测和定期监测的有效技术手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈炯	宁波大学海洋学院	100	594	13.0	18.0
2	苗亮	宁波大学海洋学院	43	184	8.0	10.0
3	段维军		19	51	4.0	6.0
4	周前进	宁波大学海洋学院	14	95	6.0	9.0
5	段丽君		15	23	3.0	4.0
6	陈先锋	宁波大学海洋学院	22	48	4.0	5.0
10	蔡怡	宁波大学海洋学院	4	23	3.0	4.0