猪细环病毒k2型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立

• 作者: 严山 修金生 吴学敏 周伦江 车勇良 陈如敬 黄秋宇
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪细环病毒k2型 ORF2基因 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR方法
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 页码范围: 10-15
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.2
• 字数: 3140字
• 语种: 中文

摘要

为建立检测猪细环病毒k2型（Porcine Torque teno sus virus k2，PTTSuVk2）SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法，本研究根据PTTSuVk2 ORF2基因序列特征设计引物，建立基于SYBR GreenⅠ检测PTTSuVk2的实时荧光定量PCR方法，该方法在PTTSuVk2 ORF2基因含量为1.92×102~1.92×107 copies/μL反应范围内有很好的线性关系。扩增产物溶解曲线分析仅出现单一特异峰，无引物二聚体，Tm值为（83.83±0.08）℃，对猪圆环病毒（Porcine circovirus type 1 and type 2，PCV1和PCV2）、猪细小病毒（Porcine parvovirus，PPV）、猪博卡病毒5型（Porcine bovavirus type 5，PboV5）、猪细环病毒1a型（PTTSuV1a）和1b型（PTTSuV 1b）核酸均无阳性信号扩增，可重复性好，组内变异系数为0.39%～1.69%，组间变异系数0.69%～2.19%。本方法的建立可用于定量分析PTTSuVk2感染噬性组织器官和感染程度，为PTTSuVk2的流行病学研究及临床诊断等提供了一种可靠的方法。