IK4基因突变体与其逆转录病毒载体的构建及在白血病细胞中的表达

• 作者: 史柳芝 贺立彩 郑倩倩
• 来源期刊: 中国科技论文
• 学科: 医学
• 关键词: 生物化学与分子生物学 IKAROS4基因 重叠延伸PCR 突变 逆转录病毒载体 表达
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 页码范围: 684-687,693
• 页数: 5页
• 分类号: R733.7
• 字数: 4134字
• 语种: 中文

摘要

对造血调控中发挥重要作用的 IKAROS基因亚型IK4进行突变，并构建重组逆转录病毒表达载体及使其在白血病细胞中表达。采用重叠延伸PCR定点突变技术，成功构建了4个 IK4单突变或多突变突变体。将这4个突变体克隆至 Pmscv‐puro逆转录病毒载体中，构建重组蛋白表达载体。基因测序验证突变序列正确后，将重组逆转录病毒载体与病毒包装质粒VS‐VG、Gag‐Pol共同感染293T细胞，过滤收集病毒上清，将病毒上清转染白血病NB4细胞。用Puromycin对细胞进行筛选，并通过Western印迹法对突变体表达细胞系进行验证。通过重叠延伸PCR法成功构建了4个 I K4的定点单突变和定点多突变体，利用逆转录病毒介导的转染方法使 I K4的4个突变体在白血病细胞中成功稳定表达，为后续的功能和机制的研究奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贺立彩	温州医科大学检验医学与生命科学学院	7	18	3.0	4.0
2	郑倩倩	温州医科大学检验医学与生命科学学院	2	8	1.0	2.0
3	史柳芝	温州医科大学检验医学与生命科学学院	2	0	0.0	0.0