Sp1对肠三叶因子启动子基础转录活性的影响

• 作者: 孙勇 张盼 张端阳 潘晓峰 王朋 邱伟
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 转录启动子 肠三叶因子 Sp1 基础转录活性
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究热点
• 页码范围: 413-417
• 页数: 5页
• 字数: 3833字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2016.07.006

摘要

目的 寻找维持肠三叶因子(ITF)启动子基础转录活性的反应元件. 方法 以ITF启动子序列为模板,采用PCR方法获取不同长度及突变的ITF基因5'侧翼序列,插入pGL3-basic质粒,构建截短及突变荧光报告载体,进行以下实验.(1)按照随机数字表法(分组方法下同)将人胚胎肾293(HEK293)细胞分为pGL3-basic组、pGL3-300组、pGL3-280组、pGL3-260组、pGL3-240组、pGL3-220组、pGL3-200组,每组3孔,分别转染对应的质粒500 ng及15 ng海肾荧光素酶报告质粒pRL-TK,培养48 h,单管型多功能检测仪检测细胞荧光素酶相对活性.(2)另取HEK293细胞,分为pGL3-basic组、pGL3-300组及突变体1、2、3、4组,每组3孔,分别转染pGL3-basic、pGL3-300及突变体1、2、3、4质粒500 ng及15 ng pRL-TK质粒.培养48 h,同(1)检测荧光素酶相对活性.(3)另取HEK293细胞,分为空白对照组及10、50 μmol/L光神霉素组,每组3孔,转染500 ng pGL3-300质粒及15 ng pRL-TK质粒后,空白对照组不加,后2组分别加10、50 μmol/L光神霉素,培养24 h,同(1)检测荧光素酶相对活性.(4)另取HEK293细胞,分为空白对照组及0.1、0.2、0.3 μg pcDNA3.1-Sp1组,每组3孔,转染500 ng pGL3-300质粒及15 ng pRL-TK质粒后,空白对照组不转染,后3组分别转染0.1、0.2、0.3 μg pcDNA3.1-Sp1质粒.培养48 h,同(1)检测荧光素酶相对活性.对数据行单因素方差分析、LSD检验. 结果 (1)pGL3-basic组、pGL3-300组、pGL3-280组、pGL3-260组、pGL3-240组、pGL3-220组、pGL3-200组细胞荧光素酶相对活性分别为1.00、7.99 ±0.51、2.03 ±-0.55、2.50 ±0.40、2.50±0.15、1.72±0.19、2.10 ±0.21,pGL3-280组、pGL3-260组、pGL3-240组、pGL3-220组、pGL3-200组细胞荧光素酶相对活性较pGL3-300组显著下降(P值均小于0.01).(2)pGL3-basic组、pGL3-300组及突变体1、2、3、4组细胞荧光素酶相对活性分别为1.00、7.99 ±0.51、2.10 ±0.56、7.03±1.05、5.09±1.40、8.15±1.48,其中突变体1组细胞荧光素酶相对活性较pGL3-300组显著下降(P＜0.01),突变体2、3、4组细胞荧光素酶相对活性与pGL3-300组相近(P值均大于0.05).(3)10、50μmol/L光神霉素组细胞荧光素酶相对活性分别为3.07 ±0.60、2.93 ±0.55,均显著低于空白对照组的8.05±0.83(P值均小于0.01).(4)0.1、0.2、0.3 μg pcDNA3.1-Sp1组细胞荧光素酶相对活性分别为12.74±1.12、14.52±1.25、15.66±1.82,均显著高于空白对照组的8.13±0.71(P值均小于0.05). 结论 ITF启动子的-301～-293 bp区域存在一个Sp1反应元件,是维持ITF启动子基础转录活性的核心元件.