NLS-RARα通过激活AKT调节白血病NB4细胞的增殖

• 作者: 刘北忠 宋浩 李浏 杨蓉 蒋开玲 钟梁 阳小群
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: NLS-RARα 急性早幼粒细胞白血病 增殖 AKT
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 41-46
• 页数: 6页
• 分类号: R557
• 字数: 3278字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建携带NLS-RARα的重组慢病毒,感染白血病NB4细胞并观察其对NB4细胞增殖和AKT蛋白的影响.方法 以质粒pCMV-HA-NLS-RARα为模板,PCR扩增NLS-RARα基因,将其亚克隆到慢病毒表达载体质粒LV5中,经DNA测序鉴定重组载体,用4质粒系统共转染293T细胞,收集病毒上清,浓缩鉴定,测定重组慢病毒的滴度;重组慢病毒感染NB4细胞,经过嘌呤霉素筛选获得稳定转染NLS-RARα的NB4细胞株;CCK-8法检测NLS-RARα对NB4细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期和感染效率;Western blot分别检测NLS-RARα、t-AKT和p-AKT的表达.结果 NLS-RARα克隆入LV5的多克隆位点,慢病毒浓缩后滴度为2×108Tu/mL;感染效率为86.54％;NLS-RARα能够明显促进细胞增殖,S期细胞增多,G1和G2期细胞减少;NLS-RARα基因在NB4细胞中稳定的表达,同时p-AKT明显增高,用PI3K抑制剂LY294002处理后p-AKT明显降低.结论 NLS-RARα通过激活AKT促进白血病NB4细胞的增殖.