猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂B6基因的鉴定、表达及抗原性分析

• 作者: 侯俊玲 刘光学 张少华 王帅 郭爱疆 骆学农 魏艳玲
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 猪带绦虫 Tsserpin B6 鉴定 表达 抗原性分析
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 334-338,345
• 分类号: R383.321
• 语种: 中文

摘要

目的 鉴定、表达猪带绦虫(Taenia solium)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Tsserpin B6),探索其作为诊断抗原的可行性. 方法 利用猪带绦虫基因组和转录组数据设计Ts serpin B6特异引物,RT-PCR扩增获得Tsserpin B6基因,对其DNA、氨基酸序列进行生物信息学分析,利用Clustal X1.83进行序列比对,并用MEGA6.0进行系统进化分析.构建pET-30a-Tsserpin B6重组表达载体,在大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21 (DE3)中诱导表达.纯化表达的蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),用猪囊尾蚴阳性血清进行蛋白质印迹(Western blotting)鉴定. 结果 Tsserpin B6开放阅读框为1 131 bp,编码376个氨基酸.其编码的氨基酸序列具有serpin较为保守的反应中心环和特征性结构域(NEEGAE和FTVDHPFLF),存在9个潜在的线性B淋巴细胞抗原表位.Ts serpin B6的表达产物相对分子质量(Mr)为53 000,主要以包涵体形式存在.Western blotting检测结果显示,所表达的蛋白可与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应,在Mr 53 000处产生特异条带. 结论 克隆了Tsserpin B6基因,其表达产物能被猪囊尾蚴阳性血清所识别.