SYBR Green Ⅰ实时荧光定量 PCR 检测 PRRSV 方法的建立

• 作者: 杨泽晓 王印 罗忠永
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 M 蛋白 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量 PCR
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4006字
• 语种: 中文

摘要

根据编码 PRRSV M 蛋白的基因序列设计用于 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量 PCR 扩增的引物，通过温度梯度法优化反应体系；以不同科属常见猪致病性 RNA 病毒疫苗验证该检测方法的特异性，参考国内 PRRSV 分子流行病学特征，选择基因型代表性的2株疫苗株验证该检测方法的稳定性；以10倍梯度稀释的质粒为标准品扩增并构建标准曲线，探究该检测方法的灵敏度，随机挑取10份保存的 PRRSV 阳性病料和10份阴性病料同时使用农业部推荐的 PRRSV RT-PCR 检疫标准方法和建立的方法进行检测，以确定2种方法检测的符合率。结果显示，使用建立的方法可以在54．4℃80 min 内完成对 PRRSV 的检测，该检测方法具有特异性和稳定性；检测灵敏度为6．8×10拷贝／μL；以 Ct 值为横坐标，扩增序列拷贝浓度的对数值为纵坐标，得到标准曲线，方程为 y＝－3．411 x＋39．002，R2＝0．999；对随机挑取的10份 PRRSV 阳性病料和10份阴性病料进行检测，结果2种方法检测结果的符合率100％。结果表明，成功建立了 PRRSV SYBR Green Ⅰ实时荧光定量 PCR 快速检测方法，为临床提供了一种很好的检测手段。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨泽晓	四川农业大学动物医学院动物检疫实验室	57	188	9.0	11.0
2	王印	四川农业大学动物医学院动物检疫实验室	104	558	13.0	18.0
3	罗忠永	四川农业大学动物医学院动物检疫实验室	5	18	2.0	4.0