犬前松弛素原基因的克隆与生物信息学分析

• 作者: 任志华 余树民 刘欢欢 夏娟 左之才 曹随忠 沈留红 邓俊良 马晓平
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 犬 前松弛素原基因 松弛素 生物信息学分析
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 页码范围: 1037-1043
• 分类号: S857.2+2
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.201509004

摘要

[目的]本试验通过对犬前松弛素原基因的分析推导获得犬松弛素基因序列,为犬松弛素多克隆抗体的制备及临床应用提供理论基础.[方法]以北京犬和吉娃娃新生胎盘、贵宾犬卵巢为材料,分别提取总RNA,经RT-PCR扩增,获得犬前松弛素原基因,应用生物信息学方法初步分析犬前松弛素原基因的结构及功能.[结果]完整克隆了从所获样品中扩增到的预期大小目的片段,包含一个534 bp的开放阅读框,编码177个氨基酸.扩增片段序列分析结果显示,与NCBI核酸数据库检索的犬前松弛素原的cDNA序列同源性为99.6％,均有3个核苷酸位点发生改变,从而引起相应氨基酸改变,但并未引起蛋白结构的变化.进化树分析结果显示,所获3条目的片段同为一支,与猫前松弛素原基因的进化距离最近.生物信息分析显示,3条序列等电点、带电荷数、最高(最低)氨基酸、消光系数、半衰期、不稳定系数均一致,相对分子质量、不稳定系数、脂肪系数、总平均疏水指数有细微差异;跨膜区、信号肽、糖基化位点分析结果一致;二级结构组成一致,包含α-螺旋、延伸链、无规则卷曲,比例存在细微差异.[结论]成功克隆了犬前松弛素原基因,可以生物信息学分析为基础进行犬松弛素多克隆抗体的制备.