抗人蔗糖酶卵黄抗体的制备及其稳定性和体外活性研究

• 作者: 冯昆 卢毓璁 周鹤峰 杜凤霞 王敏 王新颖 邵敏 魏妮娜
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 蔗糖酶 鸡 卵黄抗体 稳定性
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1785-1789
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4017字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2016.12.013

摘要

目的：：制备抗人蔗糖酶( Sucrase,SUC)卵黄抗体( egg yolk immunoglobulin Y,IgY)并对其稳定性、体外活性进行研究。方法：采用人SUC蛋白为抗原,免疫海兰灰蛋鸡,水稀释和盐析法提取纯化IgY；间接ELISA法监测抗体效价变化并评价其稳定性；SDS-PAGE和Western blot分析IgY的纯度和特异性；PNPG法测IgY对α-葡萄糖苷酶的体外抑制效果。结果：初次免疫10 d后检测到IgY,40 d后效价最高达到1：12800；提取的IgY重链和轻链分别在65 kD和25 kD处,且能够与抗原蛋白特异性结合；29~69℃范围内水浴15 min和pH 4~7之间37℃水浴4 h,抗体效价无变化；胰蛋白酶与胃蛋白酶作用IgY 2 h,抗体效价降至一半,延长作用时间,IgY对胃蛋白酶耐受力较胰蛋白酶耐受力更强；IgY对α-葡萄糖苷酶具有一定的抑制作用,呈现剂量相关性,半抑制浓度(IC50)值为0.540 mg/ml。结论：抗人蔗糖酶卵黄抗体(S-IgY)的成功制备为后续用于2型糖尿病大鼠模型体内实验研究奠定基础。