H1和H3亚型猪流感病毒二重TaqMan-MGB探针荧光RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 张俊哲 王乃福 王建华 王玉玲 肖妍 董志珍 谭旭菲 赵丹 赵祥平 陈小金 陈本龙
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流感病毒 H1亚型 H3亚型 TaqMan探针 荧光RT-PCR
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 页码范围: 90-94
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3797字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2016.10.023

摘要

根据H1和H3亚型猪流感病毒（SIV）血凝素（HA）编码基因的保守序列，分别设计合成特异性引物和TaqMan-MGB探针，建立了一种检测H1和H3亚型SIV的二重荧光RT-PCR方法。结果显示，该方法仅对H1和H3亚型SIV呈特异性扩增，对H9亚型SIV、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（SFV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）无交叉扩增反应；用该方法检测H1和H3亚型SIV的HA基因的 RNA标准对照（SIV-H1-RNA，SIV-H3-RNA），最适线性检测范围分别为3.7×101~3.7×108拷贝数/反应和3.4×100~3.4×108拷贝数/反应，最低检出限分别为38和34个拷贝数；该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于2.0%，显示其具有良好的可重复性。用该方法对520份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪鼻拭子样本进行SIV检测发现，进口猪鼻拭子样本的SIV检测结果均为阴性，12份国内猪鼻拭子样本的H1亚型SIV检测结果为阳性，5份国内猪鼻拭子样本的H3亚型SIV检测结果为阳性。本方法的建立为H1和H3亚型SIV检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。