IHHNV编码蛋白酵母双杂交诱饵载体的建及自激活研究

• 作者: 彭敏 曾地刚 朱威霖 李咏梅 杨春玲 王建平 苏绍萍 赵永贞 陈秀荔
• 来源期刊: 西南农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 凡纳滨对虾 IHHNV 自激活作用 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 畜牧·水产
• 页码范围: 2004-2008
• 页数: 5页
• 分类号: S945.1
• 字数: 4771字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16213/j.cnki.scjas.2016.08.046

摘要

应用酵母双杂交体系,构建凡纳滨对虾IHHNV 3个开放阅读框的酵母双杂交诱饵载体,并对该载体的表达产物对酵母细胞的毒性及其对报告基因的自激活作用进行检测,为运用酵母双杂交文库筛选与病毒互相作用的蛋白提供参考.对凡纳滨对虾IHHNV病毒3个开放阅读框的基因片段进行PCR特异性扩增,并运用In-Fusion技术将该基因片段与双酶切的酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7进行连接,获得重组质粒pGBKT7-CP、pGBKT7-NS1和pGBKT7-NS2,并进行自激活和毒性检测.结果表明,pGBKT7-CP、pGBKT7-NS1和pGBKT7-NS2等3个重组质粒对MEL1报告基因无自激活性;对AUR1-C报告基因无自激活作用,pGBKT7-CP,pGBKT7-NS1,pGBKT7-NS2和空载体的酵母菌在SD/-Trp液体培养基中培养16 h后,菌液的OD600均大干0.8,说明诱饵载体无毒性且不具自主激活报告基因的功能,所获得的无自激活作用的诱饵载体可用于酵母双杂交试验.