汉坦病毒通用型实时荧光定量RT-PCR方法的建立及应用

• 作者: 何南江 刘纯成 姚海波 张丽萍 时玉军 李军鹰 杨鹏飞 燕清丽 马雪征
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 汉坦病毒 基因型 定量 实时荧光RT-PCR
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 实验技术及其应用
• 页码范围: 321-324,372
• 分类号: R183|R319
• 语种: 中文

摘要

目的 建立一种适应汉坦病毒不同基因型别的通用实时荧光定量RT-PCR检测方法.方法 利用BeaconDesigner7.5软件设计引物和探针,以人工合成汉坦病毒5种具有代表性基因型别的L片段作为模板,进行实时荧光定量RT-PCR方法的建立,确定所建立方法的检测限及灵敏度并对采集的112份鼠肺进行快速检测.结果 5种模板RNA的Ct值与其稀释浓度的对数存在良好的线性关系,以HTNV为例建立的标准曲线为:y=-3.40x+46.8,R2=0.99,其最低检出限为5.32 copies/μl,对于不同基因型别的汉坦病毒,其检测最低限:HTNV为12.40 copies/μl、SEOV为5.32 copies/μl、PUUV为15.02 copies/μl、DOBV为22.14 copies/μl及SNV为24.26 copies/μl.对1 12份鼠肺样本的病毒检出率为17.86％,较巢式RT-PCR的检出率(8.04％)高.结论 建立的通用型实时荧光定量RT-PCR方法灵敏度高,检测的广谱性好,适合啮齿类动物中携带的汉坦病毒的快速检测.