凝血因子Ⅷ野生型pIRES2-ZsGreen1真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 康建民 张耀方 杨林花 王刚 王梅芳 秦秀玉 陈剑芳
• 来源期刊: 中国药物与临床
• 关键词: 血友病A 因子Ⅷ 真核表达载体 分子发病机制
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1247-1249
• 页数: 3页
• 字数: 2951字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11655/zgywylc2016.09.002

摘要

目的：本研究以含有凝血因子Ⅷ（FⅧ）cDNA的pCI/FⅧ质粒为模板构建真核表达载体pIRES2-ZsGreen1/FⅧ并进行鉴定，在HEK-293细胞中表达。方法以pCI/FⅧ质粒为模板，扩增出FⅧ的开放阅读框（ORF）区，使用Infusion酶对线性pIRES2-ZsGreen1双酶切产物及FⅧORF扩增产物进行连接，连接产物进行转化后筛选阳性克隆，对阳性克隆进行DNA测序及凝胶电泳鉴定。野生型pIRES2-ZsGreen1/FⅧ转染HEK-293细胞后，采用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测野生型FⅧ基因mRNA表达水平。结果成功构建pIRES2-ZsGreen1/FⅧ并转染入HEK-293细胞中，实时定量PCR检测FⅧmRNA在HEK-293细胞中的表达，激光共聚焦显微镜观察转染情况。结论为实时观察FⅧ真核表达载体在HEK-293细胞中的表达及FⅧ基因突变导致血友病A的分子发病机制的研究奠定实验基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨林花	山西医科大学第二医院血液科	222	741	13.0	16.0
2	陈剑芳	山西医科大学第二医院血液科	33	146	7.0	10.0
3	王梅芳	山西医科大学第二医院血液科	33	114	5.0	9.0
4	王刚	山西医科大学第二医院血液科	17	43	4.0	6.0
5	康建民	山西医科大学第二医院血液科	18	32	3.0	4.0
6	张耀方	山西医科大学第二医院血液科	23	54	5.0	5.0
7	秦秀玉	山西医科大学第二医院血液科	9	27	2.0	5.0