PRKACB基因真核表达载体的构建及稳转细胞株的筛选

• 作者: 田大力 郭剑波 陈拥 高英
• 来源期刊: 现代肿瘤医学
• 学科: 医学
• 关键词: PRKACB 克隆 表达载体
• 年，卷（期）: 2016,（22）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3543-3547
• 页数: 5页
• 分类号: R734.2
• 字数: 3115字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-4992.2016.22.007

摘要

目的:克隆人cAMP依赖性蛋白激酶催化亚单位β基因(PRKACB),构建重组真核表达载体pEGFP-C1-PRKACB,并筛选其稳定转染肺癌细胞株.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从真核细胞中扩增得到人PRKACB的全长序列,克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中,经酶切、PCR鉴定后测序证实克隆成功.将重组载体转至真核细胞,采用RT-PCR、Western blot技术检测外源基因PRKACB的表达.应用新霉素(G418)筛选出稳定转染pEGFP-C1-PRKACB的非小细胞肺癌细胞株.结果:测序结果证实成功将PRKACB基因克隆至真核表达载体中,酶切片段与预期大小一致(1 200bp).RT-PCR及Western blot结果显示:转染后的细胞中PRKACB在转录和翻译水平的表达均有明显提高.稳定转染pEGFP-C1-PRKACB的细胞株经Western blot证实其PRKACB蛋白上调最显著.结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-PRKACB,并筛选其稳定转染后上调最显著的细胞株,为进一步研究PRKACB的生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高英	中国医科大学附属第四医院病理科	40	118	7.0	9.0
2	田大力	中国医科大学附属第四医院胸外科	57	247	8.0	12.0
3	陈拥	中国医科大学附属第四医院胸外科	4	2	1.0	1.0
4	郭剑波	中国医科大学附属第四医院普外科	4	81	2.0	4.0