异钩藤碱通过mTOR非依赖性途径诱导SH-SY5Y细胞自噬发生

• 作者: 严旺 徐妍 王继业 蔡雅卫
• 来源期刊: 中国现代医生
• 学科: 医学
• 关键词: 异钩藤碱 SH-SY5Y细胞 自噬 Beclin1
• 年，卷（期）: 2016,（17）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 28-34
• 页数: 7页
• 分类号: R742.5
• 字数: 4321字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨异钩藤碱(Isorhynchophylline,IRN)人胶质瘤细胞SH-SY5Y细胞自噬的发生及其与mTOR信号通路的关系.方法 用不同浓度IRN(6、12和24 μmol/L)处理SH-SY5Y细胞24 h,免疫印迹法检测自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ的表达,免疫荧光法观察微管相关蛋白轻链3(LC3)荧光斑点标记的自噬体形成,利用溶酶体稳定剂氯喹(CQ)以及自噬抑制剂3-MA进一步明确IRN作用的途径.Western蛋白印迹法检测mTOR相关蛋白和Beclin1的表达.结果 IRN作用SH-SY5Y细胞24 h后,可显著上调LC3-Ⅱ表达,0、6、12、24 μM IRN作用后的相对表达量分别为(0.086±0.02)、(0.39±0.14)、(0.96±0.09)、(1.93±0.14).自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值增高(P＜0.01),并呈浓度依赖性,SH-SY5Y细胞内GFP-LC3荧光斑点标记的自噬体增多,在IRN不同浓度处理组(0、6、12、24 μM)中分别为2±1/细胞,4±1/细胞,8±1/细胞,和14±2/细胞.IRN联合CQ后可以促进LC3-Ⅱ的表达(0.64±0.052).IRN可以削弱a-Syn蛋白表达,在0、6、12、24 μM组中的相对表达量为(0.71±0.07)、(0.69±0.05)、(0.53±0.04)、(0.36±0.034),并呈浓度依赖性,联合3-MA后a-Syn表达上调(0.63±0.04),提示3-MA可以逆转由IRN对a-Syn的抑制效果,而CQ对a-Syn表达,与对照组比无显著影响.信号通路研究提示,对mTOR以及Beclin1表达不影响,Beclin1特异性siRNA作用后可以抑制IRN诱导的LC3-Ⅱ表达.结论 IRN可诱导SH-SY5Y细胞自噬的发生,其机制为mTOR非依赖性自噬途径,Beclin1的表达可以影响IRN诱导的自噬.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严旺	宁波市第二医院神经内科	9	20	3.0	4.0
2	王继业		4	3	1.0	1.0
3	徐妍	宁波市第二医院老年医学科	3	5	2.0	2.0
4	蔡雅卫	宁波市第二医院老年医学科	8	21	3.0	3.0