KLF4 siRNA慢病毒载体构建和鉴定

• 作者: 任晓丽 刘海霞 宋晖 陈必良 魏莉
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: KLF4 慢病毒载体 siRNA 宫颈癌
• 年，卷（期）: 2016,（19）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3601-3604,3657
• 分类号: Q782|R737.33
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2016.19.001

摘要

目的:构建上皮锌指蛋白4 (Krüppel-like factor4,KLF4)siRNA慢病毒载体并进行初步鉴定,为研究KLF4在宫颈细胞癌中的分子机制奠定基础.方法:利用公用网站中提供的RNA干扰序列设计原则,设计4个RNA干扰靶点序列,合成含干扰序列的单链DNA oligo,然后退火配对产生双链,再通过其两端所含酶切位点直接连入酶切后的RNAi慢病毒载体上;将连接产物转入制备好的细菌感受态细胞,PCR鉴定阳性重组子后,送测序验证,测序结果经比对确认正确的克隆,制备编码慢病毒颗粒的重组病毒质粒及其两种辅助包装原件载体质粒,共转染293T细胞,收集富含慢病毒颗粒上清液,对其浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液,在293T细胞中测定并标定病毒滴度.收集上清液感染宫颈癌HeLa细胞,通过qRT-PCR及Western Blot鉴定KLF4 siRNA慢病毒干扰效果.结果:成功构建KLF4 siRNA慢病毒载体.KLF4 siRNA慢病毒感染HeLa细胞后,qRT-PCR及Western Blot测定结果显示,KLF4表达明显降低.结论:KLF4 siRNA慢病毒载体构建及包装成功,可有效抑制KLF4表达,为研究KLF4生物学功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈必良	第四军医大学西京医院妇产科	352	1605	18.0	22.0
2	宋晖	第四军医大学西京医院妇产科	45	264	10.0	13.0
3	任晓丽	第四军医大学西京医院妇产科	6	14	2.0	3.0
4	刘海霞	第四军医大学西京医院妇产科	16	57	5.0	7.0
5	魏莉	第四军医大学西京医院妇产科	12	41	4.0	6.0