单细胞PCR体系的建立及其在CRISPR/Cas9靶点活性检测中的应用

• 作者: 任红艳 张佳兰 徐振宇 李莉 毕延震 郑新民
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因修饰动物 单细胞PCR 细胞裂解液 靶点活性检测
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 74-80
• 页数: 7页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20170211

摘要

单细胞PCR是以单个细胞所含的DNA或RNA为模板进行扩增,因此其模板的制备是影响整个反应成功与否的关键因素.利用三种不同蛋白酶K细胞裂解液(SDS细胞裂解液、NP-40细胞裂解液、Tween-20细胞裂解液)分别对体外培养成熟的单个猪卵母细胞进行裂解,并直接作为模板进行PCR扩增,结果表明:NP-40细胞裂解液制备的模板质量最好,其扩增效率为95％;其次为Tween-20细胞裂解液,其扩增效率为65％;SDS细胞裂解液产物中未检测到阳性条带.结合显微注射技术对sgRNA靶点活性进行检测,结果表明利用单细胞PCR结合显微注射的方法,在受精卵内对CRISPR/Cas9靶点活性进行检测确实可行,检测结果真实可靠.