扁桃拟茎点霉TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

• 作者: 吴翠萍 张华 王律 田艳丽 胡白石 褚姝频 赵玉强
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 扁桃拟茎点霉 histone H3 TaqMan探针 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
• 页码范围: 26-34
• 页数: 9页
• 分类号: S432.44
• 语种: 中文
• DOI: 10.13926/j.cnki.apps.000053

摘要

扁桃拟茎点霉(Phomopsis amygdali引起的桃缢缩溃疡病是桃生产上重要的病害之一.带菌苗木及接穗是病害向无病区传播的主要途径.严格的检疫措施是保证无病区健康生产的关键.准确、灵敏、快速的检测方法是严格执行检疫措施及研究病害发生规律的有力工具.将扁桃拟茎点霉组蛋白H3(histone H3)基因与其近缘种比对发现,该基因特异性强,适合作为分子检测的靶标.针对histone H3基因为靶标,设计了特异性引物和TaqMan探针,建立了扁桃拟茎点霉的荧光定量PCR检测方法.结果发现,该方法只能特异识别扁桃拟茎点霉.检测灵敏度可达4×101 copies· μL-1,比常规PCR检测方法高1 000倍;孢子检测最低限达2个孢子,比常规PCR检测方法高10倍,且仅需1h即可完成检测.该方法用于田间样品检测,扁桃拟茎点霉的阳性检出率达86％,高于分离培养法和常规PCR检出结果.本研究建立的基于TaqMan探针的荧光定量PCR检测体系可用于田间对扁桃拟茎点霉的快速检测.