鲤疱疹病毒2型微滴式数字PCR检测方法的建立及比较分析

• 作者: 于力 何俊强 刘荭 刘莹 史秀杰 吴志新 潘广 王津津 贾鹏 赵欣 郑晓聪
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 微滴式数字PCR 鲤疱疹病毒2型 实时荧光定量PCR 定量检测
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 126-133
• 页数: 8页
• 分类号: S945
• 字数: 5055字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11758/yykxjz.20160303001

摘要

本研究建立了定量检测鲤疱疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)的微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,并与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测方法的灵敏性、重复性、特异性和临床样品检测做了比较分析.结果表明,与qPCR相比,ddPCR具有相同的特异性,其灵敏性比qPCR低20倍.在定量CyHV-2 DNA时,ddPCR (R2=0.994)和qPCR (R2=0.994)均表现出良好的线性关系,且2种检测方法间的定量值呈正相关(R2=0.989).在定量检测相同稀释度的CyHV-2 DNA时,qPCR的定量值始终比ddPCR高10倍.ddPCR的组内和组间重复变异系数(CV)分别为0.59％-11.26％和6.55％-23.21％,而qPCR为16.57％-27.56％和22.31％-56.73％,说明ddPCR具有更好的稳定性.在临床样品定量检测时,ddPCR的检出率稍高于qPCR.本研究建立的ddPCR能够准确定量检测CyHV-2,将为CyHV-2相关研究提供有益参考.