埃及伊蚊丝氨酸蛋白酶抑制剂23的基因克隆表达与多克隆抗体制备

• 作者: 吕清巧 吴家红 商正玲 李世琪 杨茜 王政艳 程金芝 翟慧
• 来源期刊: 寄生虫与医学昆虫学报
• 关键词: 埃及伊蚊 丝氨酸蛋白抑制剂 克隆表达 Western Blot
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 著述
• 页码范围: 230-235
• 页数: 6页
• 字数: 3992字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-0507.2017.04.005

摘要

埃及伊蚊serpin23 (丝氨酸蛋白抑制剂23) 在雌蚊唾液腺特异高表达,是蚊虫唾液组分的主要蛋白之一.本文设计特异性引物序列,采用RT-PCR技术扩增获得埃及伊蚊广东电白株serpin23成熟肽序列,构建重组表达质粒pET-28a ( +) -serpin23并测序验证.经IPTG诱导表达、KCl染色、切胶纯化获取了目的蛋白;制备了小鼠特异性抗serpin23蛋白多克隆抗体.结果显示:获得serpin23成熟肽序列,全长1197 bp,编码399个氨基酸.等电点pI为6.13,具有serpin结构域和一个功能未知的FAINT结构域.pET-28a ( +) -serpin23重组质粒可表达了大小约为47 kDa、以包涵体表达为主的融合蛋白.Western Blot结果证明serpin23重组蛋白可以与抗-His标签和抗-serpin23抗体发生免疫反应,约47 kDa处产生特异性条带.本研究成功获得了埃及伊蚊广东电白株serpin23重组表达蛋白和抗serpin23多克隆抗体,为后续功能研究奠定基础.