Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP0基因在杆状病毒表达系统中的表达

• 作者: 吴双 左伟勇 朱善元 洪伟鸣 王安平 王永娟 顾玲玲
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒 VP0基因 昆虫细胞 表达
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医
• 页码范围: 365-369
• 页数: 5页
• 分类号: S834
• 字数: 3540字
• 语种: 中文

摘要

为在昆虫细胞中表达Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(duck hepatitis A virus type-Ⅰ,DHAV-Ⅰ) SH株的结构蛋白VP0,首先根据DHAV-Ⅰ SH株VP0基因序列设计一对引物,RT-PCR方法扩增出VP0基因,亚克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1,获得重组质粒pFB-VP0,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒rBacmid-VP0,在脂质体介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBac-VP0.Western-blot结果显示,表达的重组蛋白相对分子量约为29 kD,间接免疫荧光结果显示重组蛋白能与鸭抗全病毒阳性血清发生特异性反应.研究结果表明,DHAV-Ⅰ SH株的结构蛋白VP0在昆虫细胞中获得了成功表达,为VP0结构蛋白的功能研究和基因工程疫苗的研制奠定了基础.