Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达及鉴定

• 作者: 吴萌 朱善元 王安平 顾玲玲
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒 VP1基因 昆虫细胞 表达 鉴定
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 114-117
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65+9
• 字数: 3532字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2018.01.020

摘要

为在昆虫细胞中表达Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-Ⅰ)的主要结构蛋白VP1,根据GenBank已发表的DHAV-Ⅰ SH株VP1基因序列,设计1对特异性引物,通过RT-PCR扩增VP1基因,将其克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1,获得重组杆状病毒转移载体pFB-VP1,将其转化E.coliDH10Bac感受态细胞,经抗性、蓝白斑筛选及PCR鉴定后,构建重组穿梭质粒rBacmid-VP1.在脂质体介导下将重组质粒rBacmid-VP1转染昆虫细胞Sf 9,制备含有DHAV-ⅠVP1基因的重组杆状病毒rBac-VP1.Western blot结果显示,表达的重组蛋白VP1大小约27 ku,能与DHAV-ⅠVP1多克隆抗体发生特异性反应;间接免疫荧光检测结果显示,重组蛋白VP1能与DHAV-Ⅰ全病毒阳性血清发生特异性反应,细胞内出现较强的荧光.以上结果表明,在昆虫细胞中成功表达了具有免疫原性的DHAV-Ⅰ主要结构蛋白VP1.