运用CRISPR/Cas9技术敲除人源黏着斑蛋白基因

• 作者: 丁俊杰 孙嘉慧 张鑫 张阔 曾诚 郝强 陈华鑫
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9系统 黏着斑蛋白 基因敲除
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 781-784
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2691字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.06.012

摘要

目的:建立CRISPR/Cas9n系统,用于敲除人源黏着斑蛋白(VCL)基因.方法:设计一个靶向人源VCL基因第3个外显子的单向导RNA (sgRNA),分别克隆表达载体后,通过慢病毒转入人MDA-MB-231细胞,通过PCR及Western印迹检测细胞株中VCL基因的敲除效果.结果:测序结果显示靶向VCL基因CRISPR/Cas9重组质粒构建成功;PCR产物测序结果表明本次设计的Cas9/sgRNA能够对VCL基因进行编辑敲除;Western印迹显示Cas9-VCL组的MDA-MB-231细胞内VCL表达水平较对照组显著降低.结论:通过CRISPR/Cas9系统获得了靶向VCL基因的重组质粒,构建的重组质粒能有效敲除VCL.