红色荧光蛋白变种mCherry的表达、纯化和应用探讨

• 作者: 张文 惠长野 李丽梅 杨学琴 郑浩渠 郭妍 高朝贤
• 来源期刊: 国际生物制品学杂志
• 关键词: 大肠杆菌 克隆,分子 基因表达 制备 红色荧光蛋白mCherry
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 31-35
• 页数: 5页
• 字数: 3626字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2017.01.008

摘要

目的 应用pET表达系统原核表达红色荧光蛋白变种mCherry,分析重组mCherry表达与荧光变化的关系,为其纯化及作为原核报告系统应用提供依据.方法 根据GenBank中收录的mCherry氨基酸序列合成其编码基因,构建pET-mCherry表达质粒,转化入大肠埃希菌BL21 (DE3)表达宿主.在不同诱导时间点,考察菌株荧光强度、mCherry表达量、培养上清液mCherry泄漏情况.诱导10h后提取重组mCherry,利用荧光强度估算提取收率,并通过凝胶电泳分析提取液的蛋白纯度.结果 成功构建pET-mCherry表达载体,并在BL21(DE3)中得到高效诱导表达.荧光检出滞后于mCherry的表达,随诱导时间延长重组mCherry不断泄漏至培养液中.初步提取的重组mCherry纯度达到95％以上.结论 应用pET表达系统可高效表达mCherry,过表达mCherry可泄漏至胞外,方便其纯化.mCherry作为原核报告系统应用时,合理的诱导时间可能是关键影响因素.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑浩渠	广东药科大学公共卫生学院	4	4	1.0	2.0