人regucalcin和红色荧光蛋白融合基因的构建及表达

• 作者: 倪培华 吴洁敏 徐洪 胡亮 赵涵芳
• 来源期刊: 诊断学理论与实践
• 学科: 生物学
• 关键词: 红色荧光蛋白 表达 重组质粒 钙结合蛋白
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 225-229
• 页数: 5页
• 分类号: Q3
• 字数: 3988字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-2870.2006.03.011

摘要

目的:构建人regucalcin(RGN)全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.1-RGN-DsRed-zeo,观察RGN及红色荧光蛋白(DsRed)在人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2细胞)中的表达.方法:RT-PCR技术扩增获得人HK-2细胞RGN全长cNDA,将扩增的产物进行T-A克隆,经酶切、DNA测序鉴定正确,将RGN基因酶切后构成pDsRed-RGN,再将RGN基因与DsRed一起酶切构建成pcDNA3.1-RGN-DsRed-zeo的真核表达重组质粒.用脂质体将重组质粒转染入HK-2细胞,激光共聚焦显微镜观察重组质粒的表达情况.结果:BT-PCR扩增获得人HK-2细胞,其RGN cDNA全长897 bp,构建完成真核表达重组质粒pcDNA3.1-RGN-DsRed-zeo,经DNA测序与GenBank中的人RGN cDNA序列一致.经zeocin(zeo)筛选获得稳定表达重组质粒的单克隆细胞株.激光共聚焦显微镜观察到转染重组质粒的细胞中有红色荧光蛋白的表达.结论:本实验成功构建了pcDNA3.1-RGN-DsRed-zeo真核表达质粒,并发现其在HK-2细胞中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	倪培华	上海交通大学医学院检验系	104	442	10.0	13.0
2	吴洁敏	上海交通大学医学院检验系	21	48	5.0	6.0
3	赵涵芳	上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室	17	71	5.0	8.0
4	徐洪	上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室	21	39	4.0	4.0
5	胡亮	上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室	15	41	4.0	6.0