CXCL16基因与红色荧光蛋白pDsRed2-N1融合基因表达载体的构建

• 作者: 刘厚佳 卫立辛 吴孟超 张黎 杨阳 芮耀诚 郭献灵
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 趋化因子配体16 清道夫受体 重组融合基因 表达载体
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 578-581
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 3169字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2007.06.017

摘要

目的:构建人趋化因子配体16(CXC ligand 16,CXCL16)与增强型红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)的融合基因表达载体pDsRed2-N1/CXCL16,使CXCL16-RFP融合蛋白在人293T细胞中稳定表达.方法:针对CXCL16基因设计引物,扩增人CXCL16 cDNA,退火后插入含有RFP的表达载体pDsRed2-N1.测序正确的CXCL16和RFP的融合基因表达载体pDsRed2-N1/CXCL16,经脂质体转染人293T细胞株,G418筛选获得稳定转染的细胞株.荧光显微镜观察细胞转染情况,Western blotting比较转染前后293T细胞中CXCL16蛋白的表达变化.结果:经转化细菌、抽提质粒、酶切鉴定和DNA序列分析证实,CXCL16基因已正确插入pDsRed2-N1中RFP基因的上游,获得融合基因表达载体pDsRed2-N1/CXCL16.空载体pDsRed2-N1和融合基因表达载体pDsRed2-N1/CXCL16经脂质体转染人293T细胞后,在荧光显微镜下可观察到表达RFP的细胞发出红色荧光,转染效率分别可达95%和85% .pDsRed2-N1/CXCL16转染293T细胞后,CXCL16蛋白的表达水平显著上调.结论:成功构建的pDsRed2-N1/CXCL16融合基因表达载体可在293T细胞中稳定表达CXCL16蛋白,为进一步研究CXCL16在细胞增殖调控中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	芮耀诚	第二军医大学药学院	58	854	15.0	28.0
2	刘厚佳		2	33	2.0	2.0
3	郭献灵		1	2	1.0	1.0
4	杨阳		1	2	1.0	1.0
5	卫立辛		1	2	1.0	1.0
6	吴孟超		1	2	1.0	1.0
7	张黎		2	33	2.0	2.0