含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6构建

• 作者: Alexander Endler 张军 张敬 石红军 郭超
• 来源期刊: 同济大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 红色荧光蛋白 DsRed2 RNA干扰 U6启动子
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 17-20
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 2485字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰质粒载体pDsRed2-SilencerU6,便于利用荧光显微镜、FACS等实验技术开展RNA干扰研究.方法 质粒pDsRed2-N1 中DsRed2蛋白的编码基因BbsⅠ酶切位点无意突变后,破坏pDsRed2-N1多克隆位点,PCR扩增CMV启动子、DsRed2蛋白基因片段并将其克隆至RNA干扰载体pSilencerU6,得到pDsRed2-SilencerU6质粒,利用脂质体转染技术将其转染HEK293T细胞,荧光显微镜、FACS检测转染效率.结果 DsRed2蛋白编码基因序列BbsⅠ点突变正确,成功构建pDsRed2-SilencerU6载体,其在HEK293T细胞中可显著表达红色荧光蛋白,利用脂质体转染技术,转染效率达70.61%.结论 成功构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6并在哺乳动物细胞中表达,为今后开展RNA干扰研究提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张军	同济大学基础医学院生物教研室	100	1056	15.0	29.0
2	石红军	同济大学基础医学院生物教研室	29	200	8.0	12.0
3	张敬	同济大学生命科学与技术学院	55	302	11.0	14.0
4	郭超	同济大学基础医学院生物教研室	15	125	5.0	11.0
5	Alexander Endler	同济大学基础医学院生物教研室	1	2	1.0	1.0