单体红色荧光蛋白基因DsRed2的克隆及其原核表达

• 作者: 吴委林 孙云轩 康泽然 朴世领 李鹏 郑大浩
• 来源期刊: 吉林农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: DsRed2 单体红色荧光蛋白 原核表达 包涵体
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 页码范围: 420-425
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13327/j.jjlau.2016.3099

摘要

从原始质粒pDsRed2-1中分离红色荧光蛋白基因DsRed2、构建原核表达载体pGEX4T1-DsRed2,进行了原核表达.结果表明:目标DNA序列含有由678 bp构成的开放阅读框(ORF),编码由225个氨基酸构成的蛋白(红色荧光蛋白,简称RFP2).与参考序列相比,目标DNA序列在其ORF内存在一个单碱基的同义突变,所编码的目的蛋白氨基酸序列不变.DsRed2基因在常用的表达菌株BL21 (DE3)和克隆菌株DH5α中都能够表达出目的蛋白RFP2,使菌落呈现红色.在BL21 (DE3)中,在1～5h内,随诱导时间的延长,RFP2的表达量迅速增加,此后增加不明显.在原核细胞中表达出的RFP2,大多以难溶性包涵体形式存在,仅少量溶于细胞质中,但都能正常显示出红色.RFP2为单体红色荧光蛋白,且在自然光下即可激发出红色荧光;DsRed2作为报告基因,可以非常简单、方便地区分出阳性和假阳性菌落.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朴世领	延边大学农学院	56	360	11.0	14.0
2	吴委林	延边大学农学院	24	37	4.0	5.0
3	郑大浩	延边大学农学院	35	105	6.0	8.0
4	李鹏	延边大学农学院	9	7	2.0	2.0
5	康泽然	延边大学农学院	3	10	2.0	3.0
6	孙云轩	延边大学农学院	4	3	1.0	1.0