ZFPM2基因的低频变异通过影响GATA4转录调控参与圆锥动脉干畸形的发生

• 作者: 王慧君 肖德勇 郭晓 钱琰琰 陈洪波 马晓静 黄国英
• 来源期刊: 中国循证儿科杂志
• 关键词: 圆锥动脉干畸形 ZFPM2 斑马鱼 低频变异 功能研究
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 457-462
• 页数: 6页
• 字数: 4567字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5501.2017.06.011

摘要

目的 通过Sanger测序,检测圆锥动脉干畸形(CTA)患儿中ZFPM2基因的突变情况,并探讨其致病性及相关分子机制.方法 对复旦大学附属儿科医院收治的非综合征型CTA患儿的心肌组织标本cDNA进行Sanger测序,检测ZFPM2基因的突变情况.构建ZFPM2、GATA4的表达载体和ANF启动子载体,并将ZFPM2突变型引入表达载体.采用免疫共沉淀(Co-IP)结合Western blotting的方法研究野生型或突变型ZFPM2与GATA4的相互作用.采用荧光素酶报告基因系统研究野生型或突变型ZFPM2对ANF启动子活性的影响.通过mRNA注射研究hZFPM2突变对斑马鱼心脏表型的影响.结果 ①对107例非综合征型CTA患儿进行Sanger测序,男64例,年龄1月至14岁(中位年龄8个月);包括单纯型法洛四联症(TOF)39例,TOF合并卵圆孔未闭(PFO)29例,TOF合并房间隔缺损(ASD)6例,TOF合并PFO和动脉导管未闭(PDA)8例,25例为复杂表型[如房室间隔缺损(AVSD)和左位上腔静脉(LSVC)等].②在1例TOF合并PFO的患儿中,发现位于ZFPM2基因外显子4的1个杂合错义变异c.397A>Gp.M133V(rs77117583),它仅出现在东亚人群,突变频率为0.3‰,位于ZFPM2蛋白的N端转录抑制结构域,该结构域对于ZFPM2调控的GATA4依赖性转录是必需的.③HEK293T细胞和HL-1细胞中的Co-IP结果均表明ZFPM2发生M133V突变后与GATA4的结合增强.④荧光素酶报告基因实验:人胚肾细胞株HEK293T和小鼠心肌细胞株HL-1中的结果均表明,ZFPM2发生M133V突变后,其抑制GATA4对ANF的转录激活的作用增强.⑤mRNA注射斑马鱼胚胎后心脏发育畸形情况:未注射的对照组、WT组和M133V突变体组心脏畸形发生率分别为11.3％、15.0％和27.5％,M133V突变体组高于其他两组(P<0.05).心脏异常表现为:心脏的环化发生异常,心房和心室与正常心脏呈镜像.结论 在1例CTA患儿中检测到1个ZFPM2低频变异c.397A>G,p.M133V,它可能通过影响ZFPM2与GATA4的结合及GATA4转录调控来参与CTA的发生.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄国英	复旦大学生物医学研究院	215	1400	17.0	28.0
5	马晓静	复旦大学生物医学研究院	35	146	7.0	10.0
6	陈洪波	复旦大学附属儿科医院上海市出生缺陷重点实验室	15	201	6.0	14.0
7	钱琰琰	复旦大学附属儿科医院上海市出生缺陷重点实验室	3	8	2.0	2.0
8	郭晓	复旦大学生物医学研究院	1	2	1.0	1.0
9	肖德勇	复旦大学附属儿科医院上海市出生缺陷重点实验室	1	2	1.0	1.0