猬裂头蚴27kD半胱氨酸蛋白酶基因的克隆、表达及生物信息学分析

• 作者: 刘艳丹 李金福 焦梦涵 陈艳
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 猬迭宫绦虫 裂头蚴 半胱氨酸蛋白酶基因 原核表达 生物信息学
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 120-125
• 页数: 6页
• 分类号: R383
• 字数: 4324字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2017.02.006

摘要

目的 克隆、表达猬裂头蚴27 kDa半胱氨酸蛋白酶(Cysteine protease,CP)基因,并分析其生物学特性.方法 提取蛇源猬裂头蚴总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增27kDa半胱氨酸蛋白酶(27kDa CP)基因,克隆入pMD-19T载体,测序正确后将27kDa-CP基因亚克隆入表达载体pET-28a(+),构建pET-28a(+)-27kDa-CP重组质粒,转入大肠埃希菌Tran-setta(DE3)中,经IPTG诱导,表达目的蛋白27kDa CP.用镍离子柱亲和层析法纯化目的蛋白.表达产物用SDS-PAGE及Western Blotting进行分析,并运用NCBI和ExPASy等有关的生物信息学分析工具,对27 CP基因及其编码蛋白进行预测和分析.结果 CP基因序列的开放阅读框长为1 011 bp,去除信号肽序列长954 bp,登录到GenBank,获得登录号ANA52569.该基因编码一个含317个氨基酸的蛋白多肽,属于Peptidase_C39_like超家族,理论分子量约35 669.9 Da,等电点5.92.pET-28a(+)-27kDa-CP重组质粒经IPTG诱导后,蛋白在大肠埃希菌中成功表达,经纯化后的蛋白利用Western blotting检测,证明与预期大小相符,且与猬裂头蚴感染阳性血清有较好的结合反应.结论 成功克隆、表达了猬裂头蚴27kDa CP基因,获知CP基因及其编码的氨基酸序列和生物信息学.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈艳	贵州医科大学人体寄生虫学教研室	11	8	2.0	2.0
2	焦梦涵	贵州医科大学人体寄生虫学教研室	1	2	1.0	1.0
3	刘艳丹	贵州医科大学人体寄生虫学教研室	3	6	2.0	2.0
4	李金福	贵州医科大学人体寄生虫学教研室	7	6	2.0	2.0