CRX基因突变影响视紫红质转录表达和NRL蛋白稳定性的细胞学研究

• 作者: 吕雅素 张咸宁 王惠云 王红婷 童奇湖 赵娜 陆勤康
• 来源期刊: 中华眼视光学与视觉科学杂志
• 关键词: 视锥-视杆细胞同源异形框基因 神经视网膜亮氨酸拉链 2型视锥-视杆细胞营养不良 遗传性视网膜变性 双荧光素酶实验 蛋白质印迹法
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 47-52
• 页数: 6页
• 字数: 6041字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-845X.2017.01.009

摘要

目的 在细胞水平上,探讨存在和缺乏神经视网膜亮氨酸拉链(NRL)的条件下,视锥-视杆细胞同源异形框基因(CRX)突变型对调控视紫红质基因转录表达的影响,并分析CRX突变型对CRX和NRL蛋白稳定性的影响.方法 实验研究.分别构建携带野生型和c.C766T (p.Gln256X)无义突变型的CRX基因,以及共表达NRL基因和牛视紫红质基因启动子萤光素酶(pBR130-1uc)的表达载体,分别转染体外培养的293T细胞和ARPE-19细胞,再行双荧光素酶检测分析和Western blotting实验.以持家蛋白GAPDH作为内参照.结果 与野生型CRX蛋白的表达导致牛视紫红质启动子表达5倍的激活率相比,CRX/c.C766T(p.Q256X)突变所造成的相应激活率降至1/4.共表达野生型CRX和NRL基因后,激活率增高至30倍,而共转染CRX/c.C766T和NRL后,牛视紫红质蛋白的活性降至1/13.以持家蛋白GAPDH作为内参,可见存在CRX/c.C766T突变时,CRX蛋白的稳态水平大幅下降,且CRX/c.C766T突变型对NRL蛋白的稳态有一定的影响,出现NRL增高的现象.结论 在细胞水平上,CRX基因的c.C766T(p.Q256X)突变可降低所调控的视紫红质蛋白的表达,并对CRX蛋白和NRL蛋白的稳态均造成一定的影响.