花生AhGPAT9与AhLPAAT4基因的原核表达及Western Blot分析

• 作者: 姜焕焕 李昊远 杨珍 潘丽娟 焦坤 王冕 王通 禹山林 迟晓元 郝翠翠 陈娜 陈明娜
• 来源期刊: 花生学报
• 学科: 农学
• 关键词: 花生 AhGPAT9 AhLPAAT4 原核表达 多克隆抗体 蛋白质免疫印记法
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告与简报
• 页码范围: 6-12,19
• 页数: 8页
• 分类号: S565.2|Q786
• 字数: 3924字
• 语种: 中文
• DOI: 10.14001/j.issn.1002-4093.2017.03.002

摘要

酰基转移酶基因家族是甘油三酯合成的关键基因.本研究以前期克隆的AhGPAT9与AhL-PAAT4基因部分序列设计引物,构建原核表达载体,转化进大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE检测表明,重组蛋白在37℃,5h诱导条件下获得高效表达.重组蛋白经纯化和富集,对新西兰兔进行4次免疫,纯化获得的多克隆抗血清,通过间接ELISA检测,表明获得了效价比较高的多克隆抗体.通过对重组蛋白纯化后样品进行Western Blot分析,结果显示在纯化样品相应位置有明显信号,表明所制备的抗体具有很高灵敏度和特异性.并采用制备的抗体对AhGPAT9与AhLPAAT4蛋白在花生不同组织及种子不同发育时期的表达进行了Western Blot分析.为深入研究AhGPA T9与AhLPAAT4基因的功能提供了科学数据.