抗CD47单链抗体制备及抗原结合活性分析

• 作者: 席欧彦 李江伟 秦瑞坪 贾二坷 赵婷 马晓玲
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: CD47 SIRPα 单链抗体 抗原结合 阻断作用
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 开发与应用
• 页码范围: 370-377
• 页数: 8页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.04.0060

摘要

[目的]研究旨在制备抗CD47小分子单链抗体,并分析其与抗原的结合能力和阻断作用的活性.[方法]采用DNA合成方法,将抗CD47的单克隆抗体B6H12的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),通过短肽(Gly4Ser)3连接形成B6H12单链抗体(B6H12-scFv),在大肠杆菌中可溶性表达并纯化B6H12-scFv.ELISA和Western Blot方法检测与人重组CD47的结合.检测EC9706和KYSE150两种食管癌细胞表面CD47的表达,细胞ELISA和流式细胞术分析B6H12-scFv与细胞表面CD47的结合.最后采用竞争ELISA分析B6H12-scFv对CD47与髓样细胞表面的信号调节蛋白α(SIRPα)结合的阻断能力.[结果]成功获得纯度达到90％以上的可溶性单链抗体.EC9706和KYSE150细胞均高表达CD47.细胞ELISA和流式检测B6H12-scFv浓度为50 μg/mL可与EC9706表面CD47有较好结合.B6H12-scFv浓度为40 μg/mL时也可以竞争性阻断CD47与SIRPα的结合.[结论]成功地构建了抗CD47单链抗体,浓度在20 μg/mL具有EC9706的结合活性,也具有阻断作用.