蜜蜂幼虫芽孢杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 何晓杰 叶尔保勒 哈森 巴音查汗 李胜 王振宝 王科珂 艾山江 阿斯喀
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 美洲幼虫腐臭病 幼虫芽孢杆菌 TaqMan荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 诊断和检测技术
• 页码范围: 569-572
• 页数: 4页
• 分类号: S852.61
• 字数: 3011字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0425.2017.07.12

摘要

为建立蜜蜂幼虫芽孢杆菌(P.larvae)荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中幼虫芽孢杆菌16S rRNA基因保守序列设计特异性引物和探针,经反应体系及条件优化,建立了检测P.larvae TaqMan荧光定量PCR方法.结果表明:该方法与其它病原无交叉反应;最低可检出1.3×10拷贝/μL的阳性质粒,比普通PCR灵敏度高100倍;重复试验显示该方法的批内和批间变异系数均小于3％.应用该方法对50份实验室模拟样品和100份临床样品进行了检测,与预期结果一致.本研究建立的方法可用于美洲幼虫腐臭病(AFB)的早期快速检测及P.larvae定量分析.