HSV-2糖蛋白D在昆虫-杆状病毒表达系统中的表达及免疫原性分析

• 作者: 刘微 姜勇 孟桂先 张磊 朱洁 王会岩 罗晓华 董媛 郭健 陈文婧
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 生殖器疱疹 疱疹病毒2型,人 糖蛋白D 昆虫-杆状病毒表达系统
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 720-724
• 页数: 5页
• 分类号: R373.9|Q939.47
• 字数: 3958字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20170411

摘要

目的:在昆虫细胞中表达2型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)胞外区基因,检测其免疫原性.方法:以HSV-2病毒基因组为模板,PCR扩增得到gD2片段,构建至杆状病毒质粒Bacmind中,转染sf9细胞,包装重组杆状病毒,收集后连续感染sf9细胞,收获第4代重组杆状病毒(P4),通过Western blotting法鉴定蛋白表达情况,采用空斑实验检测重组病毒滴度,将P4代重组病毒作为种子大量感染sf9细胞,上清经镍柱亲和层析进行纯化,将纯化后的蛋白在第0、2和4周免疫BALB/c小鼠(gD2组),以PBS作为阴性对照(PBS组),ELISA检测小鼠血清中gD2特异性IgG滴度.结果:PCR鉴定和DNA测序,重组表达质粒gD2-Bacmind构建正确,空斑实验检测重组病毒滴度为2.0×109 pfu·mL-1,纯化的gD2重组蛋白在相对分子质量37 000处出现目标条带,纯度达90%以上.第6周gD2组小鼠免疫血清中gD2特异性IgG抗体滴度Log10平均值达到4.34,与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:利用昆虫-杆状病毒表达系统表达的gD2胞外区蛋白具有良好的免疫原性,可作为HSV-2疫苗的候选.