MPB64在杆状病毒系统中的表达纯化及免疫原性鉴定

• 作者: 姜潮 徐丹 李校堃 王晓艳 艾君 陈昱
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: MPB64 杆状病毒表达系统 Sf 9细胞 结核分枝杆菌
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 921-926
• 页数: 6页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4028字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2014.07.013

摘要

目的：在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达结核分枝杆菌蛋白MPB64，并鉴定其免疫原性。方法：目的基因MPB64连接到pFastBac载体，获得pFastBac-MPB64质粒转化DH10 Bac感受态，通过Tn7转座片段将目的基因转座到Bacmid中，得到Bacmid-MPB64穿梭载体，脂质体包被后转染Sf 9细胞收获P1代病毒，重复转染Sf 9细胞三次获得高滴度的P4代病毒，收集细胞上清通过Q Sepharose FF和Ni亲和层析柱两步层析纯化得到目的蛋白MPB64。纯化的蛋白免疫BALB／c小鼠并检测血清中抗体滴度，ELISA检测MPB64蛋白刺激脾脏细胞产生IFN-γ的浓度，MTT法检测目的蛋白对免疫后小鼠脾脏细胞的增殖作用。结果：MPB64在昆虫细胞中成功表达，纯化后蛋白纯度达90％以上，蛋白产量为35 mg／L，纯化蛋白能有效刺激BALB／c小鼠产生抗体，提高小鼠脾脏细胞培养基中IFN-γ的含量，目的蛋白在0.2～100μg／ml之间对脾脏细胞有明显的促增殖作用。结论：成功在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达了具有免疫原性的MPB64蛋白，为生产结核病疫苗奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李校堃	吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心	56	341	11.0	16.0
2	姜潮	吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心	8	15	3.0	3.0
3	徐丹	吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心	5	1	1.0	1.0
4	陈昱	吉林农业大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0
5	艾君	温州医科大学浙江省生物技术与制药工程重点实验室	1	1	1.0	1.0
6	王晓艳	温州医科大学浙江省生物技术与制药工程重点实验室	1	1	1.0	1.0