Cav1.2钙通道C末端远端片段dDCT重组质粒的构建及蛋白制备

• 作者: 刘世浩 孙德日 孙旋旋 晏珊 李越 王健 王莹 胡慧媛 郝丽英 雷帅
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: Cav1.2钙通道 C末端远端片段 pull-down方法
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 865-868
• 页数: 4页
• 分类号: R96
• 字数: 3361字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12007/j.issn.0258-4646.2017.10.001

摘要

目的 构建Cav1.2钙通道C末端远端片段(dDCT)(2 080～2 169)质粒,表达、提取、纯化蛋白并进行生物学活性鉴定.方法 将dDCT的cDNA片段插入pGEX-6p-1质粒载体并转化大肠杆菌,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导蛋白表达,超声破碎法提取蛋白.GS-4B beads纯化蛋白后,pull-down方法分析其生物学活性.结果 构建的dDCT质粒经限制性内切酶和测序双重鉴定成功,经超声破碎法提取的dDCT蛋白纯度和浓度均较高,并具有能够与GST-CT1融合蛋白浓度依赖性结合的生物学活性.结论 本研究成功构建了dDCT重组质粒,为深入探讨Cav1.2钙通道的自身调节机制奠定了重要的物质基础.