心肌Cav1.2钙通道NT片段的提取纯化及其与CaM的相互作用

• 作者: 封瑞 康泽 方涵田 苏敬阳 赵君 赵美眯 邵冬雪 郝丽英 郭凤 雷明
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: NT 提取 纯化 CaM GSTpull?down实验
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 397-400
• 页数: 4页
• 分类号: R96
• 字数: 2642字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12007/j.issn.0258?4646.2017.05.004

摘要

目的 探讨心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段提取与纯化的方法 ,并研究其与CaM的相互作用.方法将NT的cDNA插入pGEX?6p?3质粒载体后,转化大肠杆菌BL?21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代?β?D半乳糖苷(IPTG)诱导NT的GST融合蛋白表达,GS?4B beads分离纯化,PreScission蛋白酶切除GST标签,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS?PAGE)检测蛋白纯度和相对分子质量.采用GST pull?down实验研究NT片段与CaM的相互作用.结果 SDS?PAGE结果显示成功纯化获得NT蛋白片段,且具有较高的纯度.GST pull?down实验结果显示NT可与CaM结合,且具有浓度依赖性.结论 本研究成功制备与纯化了心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段,为深入研究蛋白相互作用及NT的生物学功能奠定了基础.