牛病毒性腹泻病毒RT-PCR方法的建立及应用

• 作者: 付瑞 岳秉飞 巩薇 李威 李晓波 王吉 王淑菁 王莎莎 秦骁 贺争鸣
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 牛病毒性腹泻病毒 RT-PCR 牛源样本
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 68-74
• 页数: 7页
• 分类号: R-33
• 字数: 4237字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.11.014

摘要

目的 建立用于牛源样本中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)双重RT-PCR检测方法.方法 选择已发表的BVDV 1型和BVDV 2型包含5' UTR区高保守区域基因作为靶基因,分别设计合成引物,建立双重BVDV RT-PCR方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行方法学评价.同时用建立的RT-PCR方法检测了小牛血清、小牛血清去蛋白提取液、脾多肽注射液等41批次牛源性样本和64份牛血浆样本.牛源样本和64份牛临床样本.结果 建立的BVDV RT-PCR检测方法与牛副流感病毒III型(BPIV3)、猪瘟病毒(CSFV)、乙型脑炎病毒(JEV)均无交叉反应;检测BVDV 1型和BVDV 2型DNA模板最低浓度分别为每微升8.87 × 102拷贝和6.31 × 102拷贝, BVDV 1型和2型cDNA在-30℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带.应用建立的BVDV RT-PCR方法检测41批次牛源样本和64份牛血浆样本,核酸阳性率分别为14.6%和29.7%.结论 建立的BVDV RT-PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,可用于牛源样本携带BVDV核酸的检测.