禽呼肠孤病毒TaqMan实时荧光RT-PCR方法的建立及病毒组织分布比较研究

• 作者: 刘永振 孙美玉 李凯 王笑梅 祁小乐 钟丽 高玉龙 高立
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽呼肠孤病毒 σC基因 TaqmanRT-PCR 组织分布 致病性
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 病毒
• 页码范围: 56-60
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.4
• 字数: 3994字
• 语种: 中文

摘要

根据本实验室分离禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)毒株和GenBank中已发布ARV标准毒株σC基因序列比对结果,在保守区域设计1对引物和1条特异性TaqMan探针.通过对反应条件和反应体系的优化,建立的Real-time RT-PCR在1×101~1×1010 copies/μL范围内具有良好的线性关系,灵敏度达到10 copies/μL,是常规PCR方法的100倍.本研究建立的RT-PCR与其他禽病病原无交叉反应,且批间与批内重复性试验变异系数分别小于1%和2%,表明该方法具有良好的特异性和重复性.将本实验室分离流行毒株MS01和标准毒株S1133感染SPF鸡后,利用建立的Real-time RT-PCR对ARV在鸡体内组织脏器的分布及病毒载量进行比较研究,结果表明,毒株MS01及S1133对SPF鸡的致死率分别为80%和46.7%,两株病毒均能在肝脏、脾脏、肺脏中有效复制,毒株MS01病毒载量明显高于毒株S1133,但与毒株S1133不同,毒株MS01在肾脏组织中也能有效复制.本研究不仅为禽呼肠孤病毒的诊断提供了技术手段,也有利于进一步探索流行毒株MS01高致病性的分子机制.