丝状支原体山羊亚种SYBR Green Ⅰ qRT-PCR快速检测方法的建立

• 作者: 张靖鹏 林裕胜 江锦秀 游伟 胡奇林
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 丝状支原体山羊亚种 SYBR Green Ⅰ qRT-PCR 检测方法
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 1895-1902
• 页数: 8页
• 分类号: S852.62
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.11.017

摘要

丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)可以引起羊支原体性肺炎(Mycoplasma pneumonia of goats and sheep,MPGS).现有的方法费时、不能定量,不利于Mmc的准确快速检测.为建立检测Mmc的SYBR Green Ⅰ qRT-PCR方法,本研究基于Mmc的MLC_1770基因(hypothetical protein gene)序列进行特异性引物设计,用构建的Mmc-1770重组质粒为阳性标准品建立标准曲线,进行了该方法的特异性、灵敏性和重复实验.结果显示:标准曲线相关系数R2为0.999,扩增效率是101.3％;该方法对山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)、绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipenumoniae,Mo)、巴氏杆菌(Pasteurell amuhocida,Pm)、大肠杆菌(Escherichia coli,Ec)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)及羊传染性脓疱毒(Orf virus,ORFV)均无交叉反应;最低检测限为226拷贝/μL,比常规PCR高100倍;组内变异系数为0.54％～0.79％,组间变异系数为0.70％～0.96％;对临床95份疑似MPGS样品进行检测,阳性率为11.6％(11/95).实验结果证明该方法特异性强、敏感性高、重复性好,适合于临床样品中Mmc的快速准确检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡奇林	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	57	410	11.0	17.0
2	林裕胜	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	40	164	8.0	11.0
3	江锦秀	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	30	100	5.0	8.0
4	张靖鹏	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	18	29	3.0	4.0
5	游伟	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	27	76	5.0	7.0