密码子优化的猪瘟病毒荧光抗体的表达及初步应用

• 作者: 乔绪稳 于晓明 何辉 侯继波 孙卫东 张元鹏 郑其升 陈瑾
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: CSFV 荧光抗体 原核表达 直接免疫荧光
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 295-301
• 页数: 7页
• 分类号: S854.4+4
• 字数: 6875字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.201605030

摘要

[目的]本文旨在研究大肠杆菌表达的猪瘟病毒(CSFV)荧光抗体用于病毒直接免疫荧光检测的可行性.[方法]在基因水平上对编码猪瘟病毒纳米抗体(VHH)与绿色荧光蛋白(EGFP)的融合基因进行密码子优化,优化后的融合基因插入pET32a(+)载体并在大肠杆菌BL21 (DE3)中融合表达.表达的融合蛋白经过SDS-PAGE、Western blot进行表达及可溶性鉴定.利用镍柱亲和层析获得纯化的重组蛋白,经浓缩后用于猪瘟病毒直接免疫荧光检测并与CSFV间接免疫荧光试验进行效果比较,将该荧光抗体孵育CSFV、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)感染的PK15细胞从而鉴定荧光抗体的特异性.[结果] SDS-PAGE结果表明荧光抗体在大肠杆菌中实现部分可溶性表达.特异性试验结果表明,只有接种CSFV的PK15细胞组出现明显的绿色荧光,而其他组不出现或只出现少量非特异性荧光.与用商品化单抗建立的间接免疫荧光试验结果相比,该荧光抗体建立的直接免疫荧光方法具有更强的清晰度.[结论]猪瘟荧光抗体可在大肠杆菌中高效表达,纯化后的抗体具有良好的特异性,且该抗体具有生产操作简单、制备周期短和成本低等特点.